Cultivarea rusurilor gripale in catatea alantoidiana a oualor de gaina embrionate constituie metoda uzuala pentru producerea lor in cantitate mare.
Concentrarea si purificarea se fac prin adsorbtie si elutic de pe hematii de gaina , hematiile proprii ale embrionului , hematii formolate , fosfat de aluminiu, carbonat de calciu , carbune animal , centrifugare fractionata sau tonala .In ciuda purificarii, in vaccin mai sint detectate impuritati. Dintre acestea semnalam polizaharidul care determina aparitia de aglutinine fata de aglutinogenul A si a carui sursa este oul embrionat .
Pentru prevenirea contaminarii bacteriene se recomanda ca in lichidul alantoidian sa se adauge formol 1 la 10 000 inainte de a incepe manevrele.
Inactivarea rusurilor se obtine de obicei prin tratarea lor cu formol (1/20C1/4 000), dar se poate obtine si cu raze ultraolete , P-propiolactona , hidroxilamina , acid nitros , etilmercuriotiosalicilat de sodiu sau prin actiunea fotodinamica in prezenta albastrului de toluidina .In timpul inactivarii trebuie sa se tina seama de pH, temperatura si timpul de tratare a rusului .
Dupa inactivate se adauga ca substante bacteriostatice: mcrtiolat in dilutii finale 1/10 0001/20 000 sau nitrat mercuric de fcnil .
Vaccinurile formolate pot fi pastrate citeva luni la 4_ ($4). Se va eta inghetul, care poate provoca scaderi mari ale antigenicitatii .

CONTINUT ANTIGENIC, STANDARDIZARE

Toate cercetarile efectuate pina in prezent demonstreaza ca imunitatea in grupa este in special rezultatul producerii de anticorpi.
Raspunsul anticorpilor este in strinsa dependenta de cantitatea de antigen din vaccin.Intr-o doza mica de vaccin, cantitatea de antigen incorporabila are o limita, data fiind actitatea pirogena la om a rusului gripal.
Efectul pirogen este mai mare la copii decit la adulti, fapt care limiteaza concentratia rusului in solutii saline si in acelasi timp impune ajustarea dozei si selectionarea caii de inoculare .
Vaccinurile sint standardizate prin determinarea continutului in hemagluiininc.
Cercetatorii americani standardizeaza vaccinul dupa numarul de aglutinine fata de hematiile de gaina (unitati CCA) .In Anglia, unitatea a fost definita drept cantitatea de antigen dintr-un volum de 0,25 ml care determina o aglutinare 50% .In prezent, comisia de experti recomanda etalonarea in unitati CCA sau cu ajutorul etlonului de hemaglutinina, in unitati hemaglutinantc internationale (UHT) .
Cu toate ca eforturile cercetatorilor au fost indreptate spre gasirea unei metode de standardizare a vaccinurilor usor reproductibila, problema aceasta este inca nerezolvata, deoarece masurarea continutului diferitelor componente dintr-un vaccin multivalent nu se poate face, iar elaborarea unui test care sa fie realmente corelat cu potenta vaccinului la om nu a fost inca realizata .
Determinarea unitatilor CCA sau a celor UHI este folositoare pentru aprecierea concentratiei rusului din preparatele monovalentc si la unirea acestor concentratii in vaccinul final.
Pentru standardizare s-a mai folosit si testul de potenta pentru soarece , care, desi poate demonstra existenta unor diferente de potenta intre vaccinuri, este in prezent mult criticat. Evaluarea antigenicitatii unui vaccin prin imunizarea a 10 soareci (pentru fiecare dilutie), unirea serurilor recoltate si efectuarea unei singure neutralizari este justificata prin afirmatia ca aceste animale de laborator sint mai putin supuse variatiilor decit omul; din punct de vedere stiintific, afirmatia nu este reala.
Producerea de anticorpi seroneutralizanti la oameni a fost adesea folosita ca test pentru masurarea potentei antigenice , dar eventuala folosire in vaccin a tulpinilor neade poate crea mari dificultati (8), deoarece anticorpii HAI nu evolueaza paralel cu cei seroneutralizanti.
Blaskoc si Salk sustin folosirea ..testului de extinctie anti-genica", test care consta in determinarea celei mai mici doze de vaccin care mai stimuleaza producerea de anticorpi seroneutralizanti masurabili.
Este posibil ca metoda blocarii serului sa se dovedeasca a fi o tehnica mai buna pentru masurarea antigenicitatii rusului.